1.3 化学发光免疫分析技术

化学发光免疫分析法（Chemiluminescence Immunoassay, CLIA）与化学发光酶免疫分析法（CLEIA）及生物发光免疫分析法（BLIA）均属于发光免疫分析（Luminescence Immunoassay, LIA）。

化学发光是指在化学反应过程中产生光的发射现象，化学发光免疫分析法就是将化学发光与抗原抗体结合的免疫反应相结合而建立的一种免疫分析技术。该方法弥补了放射免疫技术放射性污染的不足，具备化学发光的高灵敏性和免疫反应的高特异性双重优点。

目前常用的化学发光剂包括吖啶盐类化合物（如N-N-二甲基吖啶硝酸盐）、酰肼类（如鲁米诺）、咪唑类化合物（如2,4,5-三苯基咪唑类化合物）等。

利用CLIA法检测抗原或抗体，首先需要用化学发光剂标记抗体或抗原，然后加入待测样品中与相应的抗原或抗体结合，将结合态的化学发光标记物（抗原抗体复合物沉淀）与游离态化学发光标记物分离，随后加入发光促进剂激发发光反应，利用化学发光免疫分析仪对光强度进行检测，即可测得待测抗原或抗体的浓度。

因该方法的实验原理及步骤与酶免疫分析技术非常相似，因此具体的实验步骤此处不再详细介绍。

知识窗

化学发光法在临床医学中的拓展应用实例

有科学家将化学发光免疫检测技术与磁珠颗粒（Magnetic Particles, MPs）相结合，开发出一种能够帮助膀胱癌（Bladder Cancer, BC）和肾细胞癌（Renal Cell Carcinoma, RCC）患者测定尿液中的Survivin（存活素蛋白）的高灵敏度方法（原理如图1-8所示），将可能为BC及RCC的临床诊断及治疗提供非常有利的帮助（见参考文献）。

图1-8 化学发光免疫检测技术与磁珠颗粒结合检测Survivin蛋白（本图彩印版见后附）

图中C6和E6为识别Survivin不同抗原表位的单克隆抗体。通过抗原抗体的特异性识别结合、磁珠在磁场环境下对抗原Survivin的富集，以及对化学发光物质的光强度测定，从而可以对一份生物样品中微量存在的Survivin进行定量分析。