第1章 免疫标记技术

1.1 酶免疫技术

酶免疫分析法（Enzyme Immunoassay, EIA）是以酶标记的抗体（或抗原）作为主要试剂，将抗原抗体反应的特异性和酶催化底物反应的高效性、专一性结合起来的一种标记免疫检测技术。该法将具有高效催化活性的酶分子通过化学方法与抗体（或抗原）相结合，使其同时具备化学反应性，当与待测抗原（或抗体）结合后，通过酶催化底物产生肉眼可见的颜色反应，从而达到免疫检测的目的。该方法是一种特异而敏感的技术，检测灵敏度可达到每毫升微克（μg）甚至纳克（ng）级别。

该方法试剂稳定、无放射性污染，且通过与其他先进仪器及技术结合使其分析形式日趋多样化，简易灵活，因而在食品、医学、生物研究等多领域中广泛应用于已知或未知抗原（或抗体）的定性、定量分析。

酶免疫测定技术根据抗原抗体发生特异性识别结合反应后，是否需要分离结合的与游离的酶标记物，分为均相测定法（Homogenous）和异相测定法（Heterogeneous）。如果反应后不需要进行分离而直接检测，则为均相测定法；如果需要进行分离后分别检测，则为异相测定法。根据发生反应所依托的介质，异相测定法又可以分为液相和固相两种。

目前最为常用的酶免疫技术为固相异相测定法中的酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA）。该法将抗原或抗体吸附于固相载体上，检测过程中将待测抗体（或抗原）及酶标记物按先后顺序依次加入反应体系中，使其与固相载体上的抗原（或抗体）反应形成抗原抗体复合物，然后洗去未结合的游离酶标记物及游离抗原（或抗体），测定已结合的酶标记物的酶活性，从而确定样品中待测抗体（或抗原）的含量。